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樊克浅谈:抗肽抗体的制备实验

发布时间:2018-08-23浏览次数:814返回列表

提高免疫原性肽的抗血清,是zui简单的方法,获得非隔离的蛋白质的抗体,例如,对来自DNA序列信息的推定蛋白质序列。 这种方法也是有用的,当隔离的抗原是困难或费时,或当抗原是一个大的蛋白家族的成员。


实验步骤:

1.  将10 mg BSA溶于0.5 ml 0.1 mol/l pH6.8的磷酸钠缓冲液中,置于一个2 ml 的玻璃试管,加50 μl MBS/DMF溶液,于室温下温和搅拌30 min。
 
2.  加样到PD-10柱子上,上柱前用10 ml 的0.1 mol/l pH6.8的磷酸钠缓冲液预平衡柱子。

3.  上样后每0.6 ml 加I为一组分分部收集洗脱液,监测A280并收集一个蛋白峰。

4.  汇集一个峰的洗脱液于15 ml 的玻璃试管中。

5.  将10 μmol 的肽溶于20 mmol/l EDTA中,终浓度约为1 mg/ml。

6.  将其加到装有MBS/BSA复合物的玻璃试管中。

7.  于室温下在,氮气中振摇4 h,于4℃对3 l PBS透析过夜。

8.  换PBS后继续透析4 h。
 
9.  将样品独立分装成小份,贮存于-20℃。